البروتياز القلوي
  • Air Proالبروتياز القلوي

البروتياز القلوي

يجب تخزين البروتياز القلوي في أماكن جافة وباردة وجيدة التهوية بعيدًا عن الشمس والحرارة.

أرسل سؤال

ثمرة ضرب


التطبيق والمبدأ

يستخدم البروتياز القلوي هذا لتحديد نشاط البروتياز ، معبراً عنه بوحدات كمبيوتر شخصي ، من المستحضرات المشتقة من Bacillus subtilis var. و Bacillus licheniformis var. يعتمد الاختبار على التحلل المائي للبروتين لمدة 30 دقيقة من الكازين عند 37 درجة ودرجة الحموضة 7.0. تتم إزالة الكازين غير المائي عن طريق الترشيح ، ويتم تحديد الكازين المذاب بطريقة طيفية.


الكواشف ومحاليل البروتياز القلوية
استخدم الكازين الكازين من الدرجة Hammarsten (الولايات المتحدة Biochemical Corp. ، رقم الكتالوج 12840 ، أو ما يعادلها)
Tris Buffer (درجة الحموضة 7.0) قم بإذابة 12.1 جم من إنزيم الصف (أو ما يعادله) تريس (هيدروكسي ميثيل) أمين ميثان في 800 مل من الماء ، وقم بالمعايرة باستخدام 1 ن حمض الهيدروكلوريك إلى درجة الحموضة 7.0. ينقل إلى دورق حجمي سعة 1000 مل ويخفف إلى الحجم بالماء ويخلط.
محلول TCA قم بإذابة 18 جم من حمض الخليك ثلاثي الكلور و 19 جم من ثلاثي أسيتات الصوديوم في 800 مل من الماء في دورق حجمي سعة 1000 مل ، أضف 20 مل من حمض الأسيتيك الجليدي ، ثم خفف إلى الحجم بالماء ، واخلطه.
محلول الركيزة: قم بإذابة 6.05 جم من إنزيم تريس (هيدروكسي ميثيل) أمين ميثان في 500 مل من الماء ، أضف 8 مل من حمض الهيدروكلوريك N 1 ، واخلط. قم بإذابة 7 جم من الكازين في هذا المحلول ، وقم بتسخينه لمدة 30 دقيقة في حمام مائي مغلي مع التحريك من حين لآخر.
يبرد إلى درجة حرارة الغرفة ، ويتكيف مع درجة الحموضة 7.0 مع 0.2 نيتروجين من حمض الهيدروكلوريك ، مع إضافة الحمض ببطء ، مع التقليب الشديد ، لمنع ترسيب الكازين. ينقل الخليط إلى دورق حجمي سعة 1000 مل ويخفف إلى الحجم بالماء ويخلط.

تحضير العينة باستخدام Tris Buffer ، قم بإعداد محلول لتحضير إنزيم العينة بحيث يحتوي 2 مل من التخفيف النهائي على ما بين 10 و 44 وحدة بروتياز بكتيرية.


إجراء البروتياز القلوي
Pipet 10.0 مل من محلول الركيزة في كل سلسلة من أنابيب الاختبار 25 × 150 مم ، مما يسمح بأنبوب واحد لكل اختبار إنزيم ، وأنبوب واحد لكل إنزيم فارغ ، وأنبوب واحد فارغ للركيزة. موازنة الأنابيب لمدة 15 دقيقة في حمام مائي الحفاظ عليها عند 37 درجة ± 0.1 درجة.
بدء تشغيل ساعة الإيقاف في وقت صفر ، بسرعة pipet 2.0 مل من "إعداد العينة" في الركيزة معايرتها. امزج واستبدل الأنابيب في الحمام المائي. أضف 2 مل من Tris Buffer (بدلاً من نموذج التحضير) إلى الركيزة فارغة. بعد 30 دقيقة بالضبط ، أضف 10 مل من محلول TCA إلى كل حضانة إنزيم وإلى الركيزة الفارغة لإيقاف التفاعل. تسخين الأنابيب في الحمام المائي لمدة 30 دقيقة إضافية للسماح للبروتين بالتخثر تمامًا.
في نهاية فترة التسخين الثانية ، قم بهز كل أنبوب بقوة ، وقم بالتصفية من خلال ورق الترشيح Whatman رقم 42 مقاس 11 سم ، أو ما يعادله ، مع التخلص من أول 3 مل من المرشح.
[ملاحظة: يجب أن يكون معدل الترشيح واضحًا تمامًا.]
تحديد الامتصاصية لكل عينة مرشح في خلية 1 سم ، عند 275 نانومتر ، مع مقياس طيف ضوئي مناسب ، باستخدام المرشح من الركيزة الفارغة لضبط الأداة عند الصفر. قم بتصحيح كل قراءة بطرح القراءة الفارغة المناسبة للإنزيم ، وتسجيل القيمة التي تم الحصول عليها على أنها AU.

منحنى قياسي نقل 100.0 مجم من L-tyrosine ، كروماتوجرافي الدرجة أو ما يعادلها (Aldrich Chemical Co.) ، تم تجفيفها مسبقًا إلى وزن ثابت ، إلى دورق حجمي سعة 1000 مل. تذوب في 60 مل من حمض الهيدروكلوريك 0.1 ن. عندما يذوب تمامًا ، قم بتخفيف المحلول إلى الحجم بالماء ، واخلط جيدًا. يحتوي هذا المحلول على 100 ميكروغرام من التيروزين في 1.0 مل. قم بإعداد ثلاث تخفيفات أخرى من محلول المخزون هذا لاحتواء 75.0 و 50.0 و 25.0 ميكروغرام من التيروزين لكل مل. تحديد امتصاص المحاليل الأربعة عند 275 نانومتر في خلية 1 سم على مقياس طيف ضوئي مناسب مقابل 0.006 ن حمض الهيدروكلوريك. قم بإعداد مخطط للامتصاصية مقابل تركيز التيروزين.


حساب البروتياز القلوي
تُعرَّف وحدة بروتياز بكتيرية واحدة (PC) على أنها كمية الإنزيم التي تنتج ما يعادل 1.5 ميكروغرام / مل من L-tyrosine لكل دقيقة في ظل ظروف الفحص.
من المنحنى القياسي ، ومن خلال الاستيفاء ، حدد امتصاص محلول له تركيز تيروزين 60 ميكروغرام / مل. يجب الحصول على رقم قريب من 0.0115. اقسم القيمة المحرفة على 40 للحصول على امتصاص مكافئ لمحلول له تركيز تيروزين 1.5 ميكروغرام / مل ، وسجل القيمة المشتقة على هذا النحو AS
احسب نشاط تحضير إنزيم العينة بالمعادلة

PC / g = (AU / AS) × (22/30 واط)

فيه 22 هو الحجم النهائي ، بالمللي ، لخليط التفاعل ؛ 30 هو وقت التفاعل بالدقائق ؛ و W وزن العينة الأصلية المأخوذة بالجرام.

تعبئة وتخزين البروتياز القلوي

كيس تغليف المواد الغذائية الصلبة ، 25 كجم / برميل.


يجب تخزين البروتياز القلوي في أماكن جافة وباردة وجيدة التهوية بعيدًا عن الشمس والحرارة.

دفع :T / T ، Paypal ، Western Union ، Alibaba Trade Assurance ، VISA ، MasterCard ، الفحص الإلكتروني ، الدفع لاحقًا ، LC وما إلى ذلك.

العلامات الساخنة: البروتياز القلوي ، المصنعين ، الموردين ، البيع بالجملة ، الشراء ، المصنع ، المخصص ، في المخزون ، السائبة ، عينة مجانية ، العلامات التجارية ، الصين ، صنع في الصين ، رخيصة ، الخصم ، السعر المنخفض ، شراء الخصم ، السعر ، قائمة الأسعار ، الاقتباس ، GMP ، الجودة ، أحدث عمليات البيع ، مدة الصلاحية لمدة عامين

روى فئة

أرسل سؤال

الرجاء لا تتردد في تقديم استفسارك في النموذج أدناه. وسوف نقوم بالرد عليك في 24 ساعة.